DAG 1

I dag har jag renat plasmid från E. colibakterier och kontrollerat renhet och koncentration av plasmid.

Här kommer mina reflektioner runt laborationen.....  

Under vår rening av plasmid enligt Qiagen, så ska plasmiden har bli renat celldebris som kolhydrater, lipider, proteiner och salter. Efter en optimal rening ska endast plasmiden finnas kvar som har funnits i E. coli bakterien.  

När rening var klar fick gjordes en koncentrationsbestämning där man använde spektofotometer för att avläsa absorbansvärdet för att beräkna proteinkoncentration och kontrollera ev. föroreningar m. ha. Kvoten A₂₆₀/A_280.

Plasmidlösningen jag arbetade med har en koncentration på 0,29 µg/µL. Den koncentrationen är bra, då man ska ha en koncentration på plasmidlösningen runt 0,3 µg/µL.

Kvoten A₂₆₀/A₂₈₀ blev 1,81 och det tyder på att plasmidlösningen inte är förorenad. Godkänd kvot låg på mellan 1,6-2,0. Dock ska man vara medveten om att kvoten kan variera mellan flera mätningar då DNA-molekylen är en svårt mätt molekyl. Absorbanskvot för DNA är 1,8. Vilket är värdet vi strävar efter då plasmiden består av DNA. Hade kvoten legat närmre 2,0 kunde det varit ett tecken på att plasmidlösningen innehåller mycket RNA. Hade kvoten varit låg, under 1,6 är det ett tecken på förorening av proteiner eller från buffertarna som användes för rening av plasmid. Absorbanskvot för DNA är 1,8.  

Jag tycker att jag lyckades få en ren plasmid som uppfyller alla krav för fortsatt laboration.

Inför nästa laboration skulle jag vilja ha en liten mer genomgång av vad som kommer ske på denna laborationsdag och kanske någon typ av inplanerad förmiddagsrast och/eller eftermiddagsrast. Framförallt på eftermiddagen var man ganska trött och den hade varit skönt med en kaffepaus. 

/Nathalie